服务概述Service Overview
凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术,可用于定性和定量分析。目前已用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用,是转录因子研究的经典方法。
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- 验证型EMSA
- ⽤于验证探针是否含有可与蛋⽩质结合的位点。将结合位点突变,以突变探针为对照,野⽣型探针出现迁移条带,⽽突变探针未出现迁移条带,则说明该探针含有可与蛋⽩质结合的位点。
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- 竞争型EMSA
- 探针序列不变,不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋⽩结合,冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照,标记探针出现迁移条带,⽽冷探针迁移条带减弱或消失,则排除了假阳性⼲扰,增加实验结果准确性。
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- 超迁移EMSA
- 使⽤⽬标蛋⽩的特异性抗体,蛋⽩-探针复合物被抗体识别并结合,该三聚复合物在凝胶电泳中,迁移速率再次增⼤,出现在蛋⽩-探针复合物的上⽅的超迁移条带,验证了探针与⽬的蛋⽩的特异性结合。
服务优势Our Strengths
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- 直接测定蛋白质与核酸的相互作用,提供定性和定量信息
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- 可用于研究多种类型的相互作用,如特异性结合、非特异性结合、序列特异性等
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- 技术简单,实验操作相对容易
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- 可以使用不同的标记方法和检测技术进行适应不同实验需求
服务流程Service Process
1
接收订单及样品
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2
实验设计
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3
合成探针
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4
EMSA电泳凝胶配置
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5
EMSA反应
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6
电泳检测
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7
显色反应
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8
结果交付
客户提供Sample Requirements
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- 单块胶重组蛋⽩80-100ug(NTA或TE溶,不含变性剂),注明浓度,浓度不低于0.2mg/mL
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- 需提取核蛋白的细胞>1*10^7个细胞,⼲冰寄送;动物组织不少于400mg,植物组织不少于2g,建议客户在金开瑞表达重组蛋白;探针序列
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- 超迁移EMSA需提供IP级别抗体,不少于10μL(分装管需要提供抗体说明书)
注:以上送样量均为单组实验,若为多组实验,送样量均等⽐增加!!!涉及QPCR实验,特殊物种需提供内参序列。⼀定要有样本信息单,⽅便收样核对信息。
服务说明
特别说明:
▶ EMSA亦可⽤于研究RNA结合蛋⽩和其相关RNA序列的相互作⽤
▶ 如需要做超迁移,需提供IP级别的抗体
▶ EMSA与酵⺟单杂交,可共同验证同⼀个问题
| 服务名称 | 服务内容 | 交付内容及标准 | 服务周期(工作日) |
| EMSA | EMSA | 10个泳道(包含阴性和阳性对照) | 10 |
| 附加单项 | DNA探针合成 (≤59bp) | 含竞争型冷探针 | 7 |
| DNA探针合成 (60bp-300bp) | 含竞争型冷探针 | 12 | |
| RNA探针合成 (<40bp) | 含竞争型冷探针 | 7 |
联系方式CONTACT US
常见问题FAQ
Q1:EMSA的应用在哪些地方?
Q2:supershift EMSA是指的什么?
Q3:EMSA实验所用蛋白如何获得?
Q4:EMSA实验存在哪些主要风险?