- DNA甲基化（BSP）测序
- Bisulfite Sequencing PCR
- 立即询价 →
- 服务热线：021-6160-1695
服务概述Service Overview
BSP（Bisulfite Sequencing PCR，重亚硫酸盐测序PCR）是DNA甲基化检测的“金标准”方法，可对特定基因区域中每个CpG位点的甲基化状态进行单碱基分辨率的精准定量。本服务提供从样本处理、重亚硫酸盐转化、PCR扩增到测序分析的全流程解决方案，支持传统克隆测序与高通量测序两种模式，满足不同规模、不同精度的研究需求。
适用场景Applicable Scenarios
-
✓
- 候选基因/启动子区甲基化图谱绘制
-
✓
- 疾病标志物甲基化状态验证
-
✓
- 药物处理前后甲基化变化检测
-
✓
- 表观遗传学关联研究
实验内容Experiment Content
-
- 重亚硫酸盐转化
- 未甲基化的胞嘧啶（C）脱氨转化为尿嘧啶（U），而甲基化的胞嘧啶（5mC）保持不变。PCR后U转化为胸腺嘧啶（T），使原始甲基化信息转换为序列差异。
-
- PCR扩增
- 设计甲基化非依赖性引物（或半巢式引物）扩增目标区域
-
- 测序分析
-
克隆测序（Sanger法）：将PCR产物克隆至载体，挑取单克隆（通常15~20个/样本）测序，计算每个CpG位点的甲基化比率。
高通量测序（NGS法）：构建扩增子文库，通过深度测序（≥5000×覆盖）获得群体细胞的甲基化频率和单倍型甲基化模式。
实验流程Experimental Procedure
样本接收与质检
样本登记
外观检查
质量检测
外观检查
质量检测
→
引物设计与合成
目标序列分析
引物设计
合成纯化
引物设计
合成纯化
→
重亚硫酸盐转化
DNA提取
亚硫酸盐处理
纯化回收
亚硫酸盐处理
纯化回收
→
PCR扩增
(NGS+文库构建)
(NGS+文库构建)
PCR扩增
NGS文库构建
质量评估
NGS文库构建
质量评估
→
测序
(克隆测序或高通量测序)
(克隆测序或高通量测序)
选择克隆测序
或高通量测
序平台
或高通量测
序平台
→
数据分析
原始数据处理
比对分析
结果解读
比对分析
结果解读
服务价格及周期Service Price & Turnaround Time
| 服务模式 | 价格 | 周期 |
| DNA提取 | 免费 | 3个工作日 |
| 克隆测序（BSP） | 5个克隆测序，500元/样 | 10~15 |
| 10个克隆测序，800元/样 | 15~20 | |
| NGS-BSP | 300元/样品，20个样品起做 | 25~30 |
样本要求Sample Requirements
| 样本类型 | 最低要求 | 建议送样量 | 运输条件 |
| 基因组DNA | 总量≥200 ng，浓度≥10 ng/μL | 1~2 μg | 冰袋/干冰 |
| 组织 | 新鲜或-80℃冻存，无降解 | 5~10 mg | 干冰运输 |
| 细胞 | 细胞数≥1×10⁶ | 5×10⁶ 个 | 细胞悬液加RNA later或干冰 |
| 全血/骨髓 | EDTA抗凝，避免反复冻融 | 200~300 μL | 冰袋（4℃短期） |
注：请提供样本的物种、基因名称、参考序列或基因组坐标。石蜡包埋（FFPE）样本需额外评估降解程度。
交付内容Deliverables
常规克隆测序模式
-
每个样本5~10个阳性克隆测序峰图（.ab1）及序列文件（.seq）
-
比对到参考序列的甲基化分析报告（.pdf）：
• 每个CpG位点甲基化/非甲基化克隆数量及百分比
• CpG位点甲基化图谱（每行代表一个克隆，每个位点彩色标示）
-
实验原始数据（凝胶电泳图、转化对照测序结果）
-
详细实验方法与材料说明
高通量测序模式（NGS-BSP）
-
原始测序数据（fastq）及质控报告
-
比对结果（bam）及甲基化调用文件（.cov或MethylBed）
-
分析报告：目标区域内每个CpG位点的甲基化频率表
案例如下，一段基因的5个克隆测序的甲基化情况图
联系方式CONTACT US