CRISPR/Cas系统的主要作用原理是成熟的crRNA(CRISPR-derived RNA)与tracrRNA(trans-activating RNA)配对形成单向导RNA(sgRNA),从而引导Cas蛋白在特定的核苷酸靶位点处切割双链DNA,由此引发2种不同的DNA修复机制,即非同源重组(non-homologous end joining, NHEJ)和同源重组(homology-directed repair, HDR),从而实现对基因的编辑。利用Cas9和化学合成sgRNA形成的核糖核蛋白(RNP)替代传统的质粒、慢病毒转染模式,具有高效便捷、脱靶效应低、编辑效率高、无细胞毒性等优势,逐渐成为基因编辑基础科研实验的绝佳选择。公司依托专业化学合成平台与多年CRISPR基因编辑服务经验,我们推出高纯度、高稳定性、高效率的sgRNA化学合成服务,同步提供crRNA(CRISPR RNA)与tracrRNA(trans-activating crRNA)化学合成解决方案,覆盖基础科研、高通量筛选、临床前研究等多场景需求,助力科研工作者简化实验流程、提升基因编辑效率,为CRISPR/Cas9及衍生系统研究提供可靠支撑。
| 服务类型 | 长度范围 | 纯化方式 | 交付规格(可选) | 交付形式 | QC标准 |
| sgRNA(脱盐级) | 97-103nt | 脱盐纯化 | 1.5/3/5/10/20/30nmol等 | 冻干粉 | COA报告(含分子量、定量检测) |
| sgRNA(HPLC级) | 97-103nt | HPLC纯化 | 2/5/10/20/50/100nmol等 | 冻干粉 | COA报告(含分子量、定量、纯度检测) |
| 常规crRNA合成 | 20-42nt(可定制) | 脱盐/PAGE/HPLC | 5/10/20/50nmol等 | 冻干粉 | COA报告(含纯度、分子量检测) |
| 修饰型crRNA合成 | 20-42nt(可定制) | HPLC纯化 | 5/10/20/50nmol等 | 冻干粉 | COA报告(含修饰验证、纯度检测) |
| 通用型tracrRNA | 74nt(常规),可定制 | 脱盐/PAGE/HPLC | 5/10/20/50/100nmol等 | 冻干粉 | COA报告(含纯度、分子量检测) |
| 配套修饰型tracrRNA | 74nt(常规),可定制 | HPLC纯化 | 5/10/20/50/100nmol等 | 冻干粉 | COA报告(含修饰验证、纯度检测) |
2019年哈佛大学David Liu团队在gRNA和Cas9两方面进行了重大改造,开发了先导编辑器(Prime Editor),PE系统对CRISPR/Cas9系统进行了升级。其中,pegRNA由引导序列(Spacer)、骨架序列(Scaffold),带有编辑位点(Edit)的逆转录模板(RTT)、逆转录引物结合位点(PBS)组成。Cas9-逆转录酶会在pegRNA的引导下,精准地切开靶标DNA单链,根据逆转录模板,合成含有正确序列的DNA,完成基因编辑。具有无双链断裂、无需模板的优势,是更安全的基因敲除、敲入、突变方案。作用过程如下图:
我们针对pegRNA的结构特性,优化了固相合成工艺与纯化方案,解决了长链RNA合成中易出现的截短产物、二级结构干扰等技术难题,可高效合成长度110-266nt的pegRNA,同时支持多种化学修饰,显著提升pegRNA的抗核酸酶降解能力、细胞穿透性与结合稳定性,相较于体外转录(IVT)法,无需繁琐的克隆构建与测序验证,交付周期更短、产品质量更稳定,且无DNA污染,进一步降低脱靶风险与细胞毒性。同时,我们针对不同实验需求,提供基础型与高精度型pegRNA化学合成服务,支持常规pegRNA与工程化pegRNA(epegRNA)定制,可灵活选择纯化方式、交付规格与修饰类型,全方位满足科研与应用需求。
| 服务类型 | 适用场景 | 长度范围 | 纯化方式 | 交付规格(可选) | 交付形式 | QC标准 | 交付周期(工作日) |
| 脱盐级 | 常规科研实验、初步筛选 | 110-266nt | 脱盐纯化 | 2/5/10/20/50nmol等 | 冻干粉 | COA报告(含分子量、定量检测) | 5天起 |
| HPLC级 | 高通量筛选、临床前研究、编辑效率要求高的实验 | 110-266nt | HPLC纯化 | 2/5/10/20/50/100nmol等 | 冻干粉 | COA报告(含分子量、定量、纯度检测,修饰型含修饰验证) | 6天起 |
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- 稳定性修饰
- 2’-O-甲基(3’/5’端或内部位点)、硫代磷酸酯(PS)骨架修饰,默认搭配使用,有效提升pegRNA抗核酸酶降解能力,延长其在细胞内的半衰期
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- 荧光标记
- FAM、Cy3、Cy5等荧光基团修饰,便于pegRNA的细胞定位、转染效率检测与示踪实验
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- 靶向修饰
- 生物素、叶酸等靶向基团修饰,提升pegRNA的细胞靶向递送效率,适配特定细胞系编辑
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- 其他修饰
- 可根据实验需求定制200余种特殊修饰,如锁核酸(LNA)修饰,进一步提升pegRNA的结合特异性与稳定性