服务概述Service Overview
RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends,cDNA 末端快速扩增),又称锚定 PCR / 单边 PCR,是从已知部分 cDNA 序列出发,高效扩增未知 5' 端 / 3' 端序列、获取基因全长 cDNA的核心技术。本服务采用SMARTer RACE 优化方案,依托高保真酶与精准接头设计,解决传统 RACE 末端缺失、扩增效率低的痛点,提供从 RNA 提取、反转录、RACE 扩增、TA 克隆到测序拼接的全流程标准化服务,助力快速获取目标基因全长转录本。下图为5' RACE与3'RACE实验示意图:
适用对象:真核生物 mRNA(含 polyA 尾与 5' 帽子结构),需客户提供≥200 bp 已知序列。
典型应用:全长基因克隆、转录起始位点定位、lncRNA 全长获取、启动子区域分析、同源基因克隆等。
实验服务流程Experimental Service Process
01
方案定制
确认已知序列、样本类型、扩增类型(3'RACE/5'RACE / 全长),设计特异性 GSP 引物与巢式 PCR 体系
02
样本接收与质检
接收组织 / 细胞 / RNA 样本,检测 RNA 完整性(RIN 值≥7.0)、纯度(OD260/280=1.8-2.0),不合格样本反馈重提
03
RNA 提取与反转录
提取高质量总 RNA,采用 SMARTer 反转录试剂盒合成含通用接头的 cDNA
04
RACE 扩增(巢式 PCR)
第一轮 PCR(GSP+UPM)富集目标片段,第二轮巢式 PCR 提高特异性,减少非特异条带
05
产物纯化与克隆
胶回收目标条带,连接 TA 载体,转化感受态细胞,挑取单菌落
06
测序与拼接
Sanger 测序验证,拼接 5' 端、3' 端与已知序列,获得全长 cDNA 序列
07
报告交付
整理实验数据、测序峰图、拼接结果,生成标准化报告交付客户
服务价格及周期Service Pricing & Turnaround Time
| 服务项目 | 基础周期 | 价格 | 超过部分说明 |
| 总RNA提取 | 2~3个工作日 | / | 包含在RACE服务费用中 |
| 3′RACE | 10~30个工作日 | 2000元 | 超过基础长度(通常800 bp)部分,每500 bp增加额外时间 |
| 5′RACE | 12~35个工作日 | 3500元 | 超过基础长度(通常500~600 bp)部分,每300 bp增加额外时间 |
| 全长RACE(3'+5' ) | 5~7个工作日 | 1500元 | 3'+5'拼接克隆测序 |
送样要求Sample Submission Requirements
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- 新鲜组织
- ≥50 mg,−80℃或 95% 乙醇固定,无降解,干冰运输
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- 细胞
- ≥1×10⁶个,新鲜或−80℃冻存,无支原体污染,干冰运输
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- 总 RNA
- ≥50 ng/μL、总量≥2 μg、RIN≥7.0、无 gDNA 污染,干冰运输
交付内容Deliverables
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- 克隆产物(可选)
- 重组质粒 1 份、甘油菌液(25%)1 管
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- 原始数据
- RNA 质检报告、PCR 电泳图、测序峰图(AB1 文件)、序列比对文件
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- 正式实验报告
- 含实验原理、样本信息、质控数据、引物序列、扩增电泳图、测序结果、全长 cDNA 拼接序列及注释
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