Cas9-Cell Line Gene Knock-Out service（CGKO）基因敲除细胞系服务是针对各种常用的细胞系，进行基因片段敲除的技术服务。主要提供：Cas9介导的大片段基因敲除（非移码）的方式导致细胞基因功能缺失，基因敲除可以将基因功能完全消除，比RNA干扰获得的数据更加确定，没有RNA干扰残留的基因功能背景的干扰，目前越来越成为主流的基因功能研究方式。使用Cas9X可以让你轻松靶向更高分的文章！

使用Cas9的进行细胞系基因敲除的过程中发现：不同的位点不同的细胞系的效率差异很大，原因包括：不同的细胞株的基因拷贝数的差异很大（很多细胞系并非二倍体，而是混杂的多倍体），很多细胞的基因存在基因切割位点突变的问题（导致按照生物基因库设计的gRNA无法发挥作用），还有细胞无法获得单克隆，这些都是目前进行基因敲除的困难所在。

1. 使用Cas9蛋白和gRNA的复合物直接进行电转，提高效率的同时减少非特异的切割；（目前报道脱靶率最低的方法）；
2. 使用高效的电转设备，具备更高的电转效率和细胞存活率；
3. 使用更先进的单克隆稀释设备和方法，大幅提高阳性率；（提高2倍）
4. 持续建库：我们也将提供更多的标准细胞株和基因编辑细胞株产品供科研工作者选择；
5. 大片段敲除，可以通过PCR快速鉴定；
6. 非移码方式敲除，可以保证细胞系做基因回补无需考虑突变修饰的问题。

Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基因定点敲入细胞系是Cas9X技术团队针对实验室常用的各种细胞系，研究并确立针对不同的细胞的外源基因或者片段高效敲入（Knock-in, KI）的技术操作规程，主要目的就是：解决KI效率低下和KI片段长度限制的问题。

目前使用Cas9的进行基因KI研究方法，主要应用在目的基因后面加上标签，对目的蛋白进行定位；再有就是通过对小鼠细胞的目的基因进行修饰替换成为人的基因，用于动物的CDX模型等。KI实现的方案包括：使用合成的Oligo或者ssDNA（single-stranded DNA，ssDNA）作为“Donor”来实现长片段的敲入；也可以通过AAV病毒的方式（其病毒以ssDNA的方式存在于细胞核中）导入ssDNA作为“Donor”载体，也可以通过dsDNA片段或者环状质粒作为“Donor”来实现KI的目的。

但是不同的细胞模型KI的效率依然不能令人满意，且不同的细胞系之间的效率差异很大，很多细胞无法实现定点的KI。 Cas9X针对不同的片段的长度和不同的细胞特性使用不同的KI策略：小的片段使用Oligo进行KI，再长一点的使用ssDNA进行KI，如果长度超过1Kb的将使用重组的办法进行KI。针对细胞系的KI效率非常低的，需要先构建Cas9稳转细胞株再进行gRNA和Donor的转染来提高KI效率。Cas9X努力优化实验条件满足不同细胞系和不同片段长度的KI服务需求。

Cas9X将为你的细胞探索最优化的KI实验方案。

Cas9-Cell line Gene Mutation service（CGM）基因点突变细胞系是细胞基因研究方法中非常有用的一个手段，可以在细胞内原位对点突变的功能进行研究。在细胞系上实现高效的转染是实现基因点突变的前提；提高效率要解决问题是：Cas9切割位点与“点突变”位点之间距离导致点“点突变”效率大幅下降的问题，还有“点突变”载体的选择问题。

目前使用Cas9的引入基因“点突变”的具体实验实践中的“单碱基突变”的效率仍然受到很多要素的影响，例如是否在点突变附近是否存在有合适的gRNA切割位点、切割位点和突变位置之间距离、不同细胞系之间的Cas9切割活性效率差异的问题、还有细胞株是否存在“假基因”和基因“多拷贝”的问题导致无法获得纯合的问题等等。

Cas9X针对不同单碱基突变的情况使用不同的Mutation载体策略：包括短同源臂可以使用Oligo引入突变，需要长同源臂的使用ssDNA引入突变。而针对难以操作的细胞系，将需要通过先构建Cas9稳转细胞株再进行gRNA和载体共转染来提高效率。Cas9X针对每个具体的位点、每个具体的细胞优化实验条件用来满足不同细胞系和不同位点突变的服务需求。