- 慢病毒稳筛细胞株定制
- Custom Lentiviral Stable Cell Line Screening
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慢病毒载体可高效感染分裂及非分裂细胞，将外源基因稳定整合至宿主基因组，实现长期、稳定的表达，是构建稳定细胞株（稳转株）的金标准方法。相较于传统质粒瞬时转染，慢病毒侵染技术转导效率更高、适用细胞范围更广，可高效感染难转染细胞（干细胞、原代细胞、悬浮细胞、神经元细胞等），彻底解决瞬时转染表达短暂、效率低、重复性差的痛点，广泛应用于基因功能验证、信号通路研究、药物靶点筛选、抗体药效评价、CAR-T细胞活性检测等科研与产业场景。慢病毒感染筛选法是目前广泛运用的稳转株构建方法，具有高效整合，目标细胞广泛等特点。最常用的真核表达载体抗性筛选标志物有新霉素（neomycin），潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素（puromycin）。常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
高效率 & 广谱性
慢病毒滴度高，转导效率可达90%以上，适用于多种难转染细胞
稳定整合，长期表达
外源基因整合至基因组，遗传稳定性>99%，连续传代2个月以上表达不丢失
灵活定制化
可选抗性标记（Puro/Neo/Hygro）及荧光报告基因（GFP/mCherry），支持Tet-On/Off诱导表达系统
全程质控，数据可溯
提供支原体检测、无菌检测、目的基因测序及表达验证（qPCR/WB/流式）报告
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- 基因过表达稳转细胞株
- 构建携带目的基因的慢病毒载体，侵染靶细胞后筛选获得稳定高表达目的基因的细胞株，支持普通过表达、定点过表达、突变型基因过表达，适配基因功能增益、靶点激活、蛋白功能研究等实验。
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- 基因敲低（shRNA）稳转细胞株
- 基于慢病毒介导的shRNA干扰技术，特异性沉默靶基因表达，筛选获得稳定低表达目的基因的细胞株，可提供多条靶点序列筛选最优干扰效率，适用于基因功能缺失、信号通路抑制、基因拮抗机制研究。
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- 报告基因稳转细胞株
- 整合GFP、RFP、Luc荧光素酶、LacZ等报告基因，构建可视化、可定量检测的稳转细胞株，广泛用于药物筛选、信号通路活性检测、细胞示踪、蛋白定位分析等场景。
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- 标签融合稳转细胞株
- 构建Flag、HA、Myc、His等标签与目的基因融合表达的细胞株，方便后续蛋白纯化、WB检测、免疫共沉淀等分子实验，降低实验操作难度。
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- 1-3工作日
- 方案定制
对接确认靶细胞类型、目的基因ID/序列、修饰方式（过表达/敲低/报告基因）、筛选标记、表达要求、实验用途；针对难转染细胞、特殊基因片段定制专属实验方案，明确MOI值、抗生素筛选浓度等核心参数
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- 3-5工作日
- 载体构建与测序验证
合成或克隆目的基因，构建至慢病毒专用载体（pLVX、pLKO等），进行酶切、测序验证，确保载体序列100%正确，无突变、无缺失
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- 4-6工作日
- 慢病毒包装与扩增
转染293T包装细胞，进行慢病毒组装、扩增、浓缩与纯化，通过TCID50法测定病毒滴度，筛选高滴度、高活性病毒液用于后续侵染
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- 5-7工作日
- 细胞侵染与抗性筛选
提前完成细胞抗生素浓度预实验，确定最佳筛选浓度；按最优MOI值侵染靶细胞，培养后加入抗生素持续筛选，获得阳性多克隆稳转细胞
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- 7-10工作日
- 单克隆挑取与扩增
采用有限稀释法或流式分选法挑取单克隆细胞，单独培养扩增，去除杂细胞，保证细胞株性状单一、均一稳定
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- 3-5工作日
- 多重鉴定与质控
通过qPCR（mRNA水平）、Western Blot（蛋白水平）、荧光成像（报告基因）、流式细胞术等方式检测基因表达/干扰效率，同时检测细胞活力、增殖状态，剔除异常克隆
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- 1-2工作日
- 细胞冻存与成品交付
将合格稳转细胞株梯度冻存，留存备份，整理全套实验数据与报告，打包交付客户
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- 基因信息
- 目的基因NCBI序列 / Gene ID / 质粒图谱（若无则提供基因合成服务）
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- 抗性/标记需求
- Puromycin, Neomycin (G418), Hygromycin，是否添加荧光标签（GFP/mCherry）
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- 细胞系要求
- 提供细胞名称、来源证明，或由我方代购ATCC/中科院细胞库冻存管
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- 应用场景说明
- 过表达/敲低/基因编辑/诱导表达，以便优化筛选方案