在斑点杂交中，要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的，相反，将含有被检测分子的混合物直接点在膜上，烘烤固定。然后与m6A或Ac4C抗体(Western blot)杂交后检测，步骤如下：

（1）交联：在65℃下5分钟,使mRNA变性以破坏RNA中的二级结构。变性后立即在冰上冷却，以防止mRNA的二级结构重新形成。将2 μl的mRNA直接滴加到Immobilon-Ny+尼龙卷膜上，在紫外线交联剂中进行交联。轻轻振荡5分钟，洗涤未结合的mRNA。

（2）封闭：在室温下温和摇动，将膜在10 ml封闭缓冲液（5%脱脂奶粉）中孵育1小时。

（3）一抗孵育：将膜置于5ml抗体稀释缓冲液（1:250稀释; 2 μg/ml）中，于4℃温和摇动过夜孵育膜。

（4）清洗：于洗涤缓冲液中轻轻洗涤3此，每次5分钟。

（5）二抗孵育：将膜置于5ml Goat anti rabbit IgG-HRP（1：10,000稀释;  20 ng/ml）二抗稀释缓冲液中，在室温下温和摇动孵育膜1小时。

（6）清洗：于洗涤缓冲液中轻轻洗涤3此，每次10分钟。

（7）在室温下在黑暗中将3 ml Western Blotting底物孵育5分钟。于天能全自动化学发光图像分析系统记录斑点印迹结果。

N6-甲基腺嘌呤（m6A）是真核生物RNA分子中最常见及丰度最高的修饰方式，m6A占所有RNA碱基修饰的比例超过80%，而且在不同的物种中存在。m6A主要分布在mRNA中，同时也存在于非编码RNA中。mRNA转录本中的m6A相对丰度已经被证实能够影响RNA代谢过程，如剪切、出核转运、翻译能力和稳定性、RNA转录等。异常的m6A甲基化水平受到m6A RNA甲基化酶和去甲基化酶的影响，从而导致RNA的异常功能及疾病的发生。因此，RNA中动态可逆的m6A化学修饰能够作为新的表观遗传学标志物，具有重要的生物学作用。认识RNA转录本中m6A甲基化水平和分布能够有利于疾病的诊断和治疗。

继m6A甲基化修饰之后，2018年11月15日，美国国立卫生研究院（NIH）的Shalini Oberdoerffer研究组在Cell杂志在线发表题为：Acetylation of Cytidine in mRNA Promotes Translation Efficiency的研究论文，该论文揭示N4-乙酰胞苷（ac4C）由乙酰转移酶NAT10催化的mRNA修饰，证明mRNA乙酰化在体外和体内增强底物翻译。本检测采用本公司自研的 m6A/Ac4C RNA甲基化定量检测试剂盒，通过比色的方法定量总RNA中m6A/Ac4C 的甲基化或乙酰化程度，适用于哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒等物种。

检测原理是在特定的结合缓冲液中，将待检测的total RNA/mRNA或者标准品结合到微孔板表面，然后依次加入特异性的m6A/Ac4C捕获抗体、检测抗体和显色试剂，最终显示的颜色深浅与样品中m6A/Ac4C的浓度呈正比，利用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线即可计算样品中m6A/Ac4C的绝对含量，同时通过total RNA总量校正可对不同样本中m6A/Ac4C含量进行比较。